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ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)方法

原載自:m.tljr.com.cn[技術(shù)資料頻道]  2016-10-20  瀏覽次數(shù):1596

   ATCC細(xì)胞的基本原理是通過(guò)在支持物(如蓋玻片)上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,可以應(yīng)用抗體檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞貼壁牢固,能夠維持細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的狀態(tài)。
  ATCC細(xì)胞培養(yǎng)方法操作步驟:
  1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
  3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
  4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
  5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁ATCC細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
  ATCC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
  1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
  4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
  5.如果ATCC細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

 

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