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腫瘤細(xì)胞的四大原代培養(yǎng)方法闡述

原載自:m.tljr.com.cn[技術(shù)資料頻道]  2021-04-19  瀏覽次數(shù):2327

   腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心位置,首先腫瘤細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。當(dāng)前建立的細(xì)胞系中腫瘤細(xì)胞系是多的。另外腫瘤對人類是威脅大的疾病。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)對闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格,一般常用RPMI、DMEM、McCoy-5A等培養(yǎng)基,血清濃度不高,10%即可,建議在原代培養(yǎng)時(shí)能加入生長因子或原患者血清(1%-2%)以利細(xì)胞生長。培養(yǎng)方法很多,主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細(xì)胞法等。
  1.組織塊法
  將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎組織,切成1-2mm3小塊,接種于事先涂有鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶(或皿)中,37℃、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。
  2.酶消化法
  在上述的碎組織塊中加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶,在37℃水浴中消化30min或更長一些,去除消化液,用洗液洗3次,培養(yǎng)基洗1次后,用*培養(yǎng)基懸浮,并用吸管吹打分散制成細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。以(5-10)·108個(gè)/L細(xì)胞濃度,在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中,在37℃、5%CO2下分瓶(或皿)中培養(yǎng)。
  3.鉭網(wǎng)法
  在一張面積約為1cm²的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊(1-2mm3大小),用鑷子輕壓,使其粘于網(wǎng)上,再把但網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中,使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸,于37℃、5%CO2下培養(yǎng),每隔2-3天換液一次,5天后可見有上皮細(xì)胞從網(wǎng)上移出,并能在相當(dāng)于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細(xì)胞。
  4.脫落細(xì)胞法
  將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織,洗液洗2次后,用刀片將腫瘤組織切成細(xì)薄片,在切割的同時(shí)有許多上皮細(xì)胞脫落下來,脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后,加入*培養(yǎng)基,便可獲得較純的上層細(xì)胞,于培養(yǎng)瓶(或皿)中,37℃、5%CO2下培養(yǎng),每隔2-3天換液一次,7-10天上皮細(xì)胞逐漸長成單層。

 

 

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