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技術(shù)文章 / article
你知道ATCC細(xì)胞如何解凍嗎？
原載自：m.tljr.com.cn[技術(shù)資料頻道] 2022-03-02 瀏覽次數(shù)：1353
ATCC細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通過在支持物（如蓋玻片）上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞，可以應(yīng)用抗體檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞貼壁牢固，能夠維持細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的狀態(tài)。
ATCC細(xì)胞的冷凍保存方法：
傳統(tǒng)方法是冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16-18小時(shí)（或隔夜）→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
程序降溫則利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞之保存。
那么ATCC細(xì)胞又如何解凍呢？
1.冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。
2.細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常。
3.材料：37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器。
4.主要步驟：
?、俨僮魅藛T應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害；
?、谧砸旱蚋杀萜髦腥〕隼鋬龉埽瑱z查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易松掉；
?、蹖⑿迈r培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)；
④取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)；
?、萑〕鼋鈨鲋?xì)胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)（稀釋比例為1：10-1：15），混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測(cè)試；
?、藿鈨龊笫欠窳⒓慈コ鋬霰Ｗo(hù)劑（如DMSO），依細(xì)胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi)，離心1000rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
?、呷舨恍枇⒓慈コ鋬霰４鎰瑒t在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
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