T細胞在癌癥、感染和自身免疫性疾病相關(guān)的不同類型的免疫反應(yīng)中都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。T細胞與抗原呈遞細胞的特異性相互作用往往決定了T細胞的命運并調(diào)節(jié)其抗腫瘤反應(yīng)?；A(chǔ)及臨床研究發(fā)現(xiàn)了許多調(diào)節(jié)T細胞功能的免疫調(diào)節(jié)分子，其中，表達在T細胞上的免疫檢查點分子通過激活信號（共刺激分子）或抑制信號（共抑制分子）調(diào)節(jié)T細胞功能，在免疫系統(tǒng)中起著核心作用。目前，靶向T細胞功能的免疫檢查點抗體療法已經(jīng)獲得了激動人心的療效，取得了很大的成功，其中包括針對程序性細胞死亡蛋白1（PD-1）及其配體PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等單抗藥物已廣泛運用于黑色素瘤、轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各種腫瘤患者。

在迄今發(fā)現(xiàn)的免疫檢查點分子中，CTLA-4抑制T細胞的作用機制是為人們最深入了解的機制之一。CTLA-4，又稱CD152，是一種跨膜糖蛋白，可與CD28競爭性地結(jié)合抗原呈遞細胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，當與配體結(jié)合時，可作為T細胞激活的“關(guān)閉”開關(guān)，針對CTLA4的單抗Ipilimumab是一個被成功用于黑色素瘤患者的免疫檢查點藥物。

PD-1（也稱為CD279），是一種T細胞表面受體，通過與配體其PD-L1和PD-L2的相互作用對抑制T細胞活性起著重要作用。與CTLA-4信號類似，PD-1結(jié)合其配體抑制T細胞增殖，細胞因子如干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子和白細胞介素2（IL-2）的產(chǎn)生，并減少T細胞的存活，但與CTLA-4不同的是，它主要調(diào)節(jié)組織和腫瘤內(nèi)的效應(yīng)T細胞活性，而不影響淋巴器官中的T細胞活化。

藥物研發(fā)現(xiàn)狀

盡管通過抗體藥物對免疫檢查點信號阻斷在癌癥治療中取得了顯著的成功，但目前，大多數(shù)患者仍不能從單一靶點的阻斷中獲益。例如，雖然臨床上針對PD-1和CTLA-4通路的抗體藥物，已被用于多種癌癥適應(yīng)癥，但大多數(shù)患者單一使用PD-1或CTLA-4阻斷劑并無效果。因此，針對一種以上的免疫檢查點抗原的抗體組合療法被認為是一種潛在的有效策略。臨床前動物實驗表明，聯(lián)合阻斷CTLA-4和PD-1信號通路可延長B16黑色素瘤模型和K7M2轉(zhuǎn)移性骨肉瘤模型的動物存活時間，而單獨使用抗體阻斷CTLA-4或PD-1則效果有限。而在臨床上，PD-1/L1與CTLA4的抗體組合療法也已被廣泛研究及應(yīng)用，早在2015年，Nivolimab+Ipilimumab的聯(lián)合方案即獲美國FDA批準治療黑色素瘤，成為上市的雙I-O聯(lián)合方案，此后又有多個適應(yīng)癥獲批（腎癌、肝癌及結(jié)直腸癌等）。

此外，阿斯利康的I藥（Imfinzi）聯(lián)合tremelimumab也在不同癌種上獲得了積極的臨床效果。此外，國內(nèi)一些藥企也在開展多個類似的聯(lián)合用藥的臨床實驗，如和鉑醫(yī)藥就其CTLA4抗體HBM4003與君實生物的PD-1單抗聯(lián)合治療方案已經(jīng)在黑色素瘤，晚期非小細胞肺癌，晚期肝細胞癌，晚期神經(jīng)內(nèi)分泌瘤/癌以及其它多種實體瘤上開展了臨床實驗；而祐和醫(yī)藥也在前幾日宣布NMPA批準了其在研創(chuàng)新藥抗CD40單抗YH003、抗CTLA-4單抗YH001聯(lián)合抗PD-1帕博利珠人源化單克隆抗體注射液的一期臨床試驗IND申請。

盡管CTLA-4和PD-1/L1聯(lián)合使用療法取得了不錯的進展，但在有些臨床案例中兩者聯(lián)合并沒有獲得倍增的療效，反而增加了毒副作用的風(fēng)險，這既可能取決于不同的臨床方案和病人選擇，也與同時使用兩種藥物產(chǎn)生的雙免疫毒性相關(guān)，另外聯(lián)合使用往往價格昂貴，對于腫瘤患者來說也是巨大的經(jīng)濟負擔(dān)。為了進一步提高療效，減少毒副作用，隨著近年來雙抗技術(shù)的發(fā)展，同時靶向CTLA4和PD-1/L1的雙抗藥物也在積極的開發(fā)中，康方生物的AK104是優(yōu)先進入臨床試驗的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物，該藥于2017年10在澳大利亞進入I期臨床,在國內(nèi)，去年8月NMPA也授予其新藥上市申請的優(yōu)先審評資格，用于治療復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性宮頸癌，有望成為一個獲得批準上市的CTLA4/PD-1雙特異性抗體藥物;而國外藥企阿斯利康開發(fā)的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物MEDI5752也緊隨其后，于2018年4月在澳大利亞進入臨床；而康寧杰瑞開發(fā)的KN046則是一款同時靶向CTLA-4和PD-L1的雙抗藥物，目前該藥物在澳洲，中國，美國也均已獲批臨床試驗，處于不同的臨床試驗階段。
 

針對CTLA-4&PD-1/L1抗體藥物的研發(fā)，科佰生物特別開發(fā)了CTLA&PD-1/L1雙靶點細胞篩選模型，可從細胞水平功能性的測活及評估CTLA4&PD-1/L1聯(lián)合用藥以及雙特性抗體的藥效，產(chǎn)品信息及相關(guān)數(shù)據(jù)如下：

PD-1/CTLA4 Dual Effector Reporter Cells CBP74150

PD-L1/CD80&CD86 aAPC Cells CBP74151

Fig 1. The CTLA-4+PD-1 Combination Reporter Assay reflects the mechanism of action of biologics designed to block the PD-1/PD-L1 and CTLA-4/CD80&86 interaction. PD-1/CTLA-4 Dual Effector Cells were incubated with PD-L1/CD80&86 aAPC Cells in the presence of serial titrations of Anti-CTLA-4, Anti-PD-1 or both of the blocking Abs as indicated.

藥物靶點模型

報告基因細胞模型可以很好的反映分子作用機制，同時具備更小的變異性和更好的可操作性，已被中檢院及藥企廣泛應(yīng)用于抗體藥物生物活性的檢定，對于藥物研發(fā)、質(zhì)量控制、批次放行都有重要意義。

科佰生物公司十分重視研發(fā)創(chuàng)新，憑借細胞功能改造技術(shù)、高精度和靈活的基因編輯工具平臺，提供包括激酶，GPCR，免疫治療，耐藥等多類疾病靶點的藥物檢測細胞模型。目前已覆蓋四百多株現(xiàn)貨細胞模型，同時提供高質(zhì)量的Cell-base生物測活服務(wù)。


免疫治療靶點細胞模型

● T Cells Activation Assays (NFAT, IL2, NFkB….)

● Fc Effectors Activity Assays ( ADCC, ADCPs…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Inhibitory Targets (PD-1/PD-L1&2, TIGIT/CD155, CTLA4, LAG3, LILRB4/APOE, CD112R/CD112, SIRPa/CD47, TIM-3, BTLA/HVEM, CD161/CLEC2D, TIGIT&PD-1, LAG3&PD-1, CTLA4&PD-1 Combi…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Stimulatory Targets (OX40, 4-1BB, GITR, CD27, HVEM/LIGHT, CD28…)

● Cytokines and Growth Factor Assays ( BCMA, TGFβ, EGF, CSF1R,IL2, 15, IL4&13, IL6, IL11, IL12, IL23, IL36, IFNs,RANKL…)