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原載自：m.tljr.com.cn[行情動態(tài)] 2020-04-09 瀏覽次數(shù)：1140

　　對于需要往動物體內(nèi)注射表達有外源片段的細胞需要構建穩(wěn)定細胞株，以防止注射入動物體內(nèi)后，很快外源片段表達丟失。此外，細胞個體差異(同一類細胞，不同個體細胞基因組存在差異)對實驗結果有干擾，需要構建單克隆細胞株去除干擾。

　　由于細胞個體差異對實驗結果有影響。體外培養(yǎng)非原代細胞，多為轉化細胞系或者癌細胞，細胞個體差異大，瞬時轉染或者使用腺病毒/腺相關病毒載體進行轉導更可以反映細胞群體行為?；蛘呤褂媚孓D錄病毒載體構建混合穩(wěn)定株。

　　細胞株構建實驗需要注意哪些因素？

　　1.外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。

　　2.整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。

　　3.整合位點的轉錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉錄活性比較高。

　　4.整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導致穩(wěn)定株再次丟失的情況。

　　5.使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株，或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較，可以幫助研究人員獲得更精確的實驗數(shù)據(jù)。