原代細胞

　　用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

　　細胞系

　　原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

　　也有認(rèn)為細胞系（cell line）指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系（Finite Cell Line）、無限細胞系（Infinite Cell Line），因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細胞稱為細胞株（Cell Strain）。

　　細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

　　動物細胞是生產(chǎn)治療性重組蛋白的強有力工具。為與小分子藥物區(qū)別開來，治療性蛋白、疫苗以及細胞治療產(chǎn)品統(tǒng)稱為生物制品。宿主細胞的選擇和改造對于提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量來說至關(guān)重要。因此必須對細胞進行篩選，選出具有高表達量和良好生長特性的細胞。在此我們主要討論適用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的細胞株的篩選。

　　工業(yè)上重組蛋白的制備主要有兩種方式：瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染經(jīng)常用于制備少量蛋白（多達克級）用于藥物開發(fā)早期的蛋白活性或動物實驗。瞬時轉(zhuǎn)染并不產(chǎn)生克隆細胞株，它只是暫時將編碼外源蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)入已有的細胞株里面（比如HEK293或COS細胞）。隨著細胞的分裂外源基因不斷丟失，蛋白產(chǎn)量較低，一般在1-100mg/L。近年來有報道稱HEK293細胞中瞬時表達產(chǎn)量可達1g/L。

　　與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細胞株是為工業(yè)化生產(chǎn)治療性蛋白而構(gòu)建的。穩(wěn)定細胞株需要具備在不同的時間，不同的場地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質(zhì)量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用細胞株之后，需要建立主細胞庫（mater cell bank）。從主細胞庫復(fù)蘇后，擴增建立工作細胞庫（working cell bank），工作細胞庫用于生產(chǎn)。細胞庫通常保存在液氮中，需要維持整個產(chǎn)品的生命周期。在構(gòu)建生產(chǎn)用細胞株的過程中，宿主細胞和表達載體至關(guān)重要。

上一篇 : ATCC細胞的分類檢測是怎么完成的？    下一篇 :  ATCC細胞株購買運輸是關(guān)鍵

>> 返回首頁