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HCoV-229E和HCoV-OC43都是在1960年代發(fā)現(xiàn)的，多年來(lái)一直被*為引起普通感冒的原因，并在一生中引起頻繁的再感染。在成年人中，這些病毒每年占急性呼吸道疾病的 4％至15％，在高峰期高達(dá)35％。兒童的年發(fā)病率達(dá)到8％，發(fā)病率高達(dá)20％。據(jù)報(bào)道，成人中229E和OC43病毒的感染頻率為每年每100人15至25人不等，其中有80％的感染者是先前具有該感染病毒抗體的人。

NCBI收錄序列為KX344031.1，全長(zhǎng)30713bp，基因編碼5個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白：S，M，N，HE和E。

• S蛋白（spike protein）穿過(guò)病毒膜，并在冠狀病毒“冠狀”中形成特征性的尖峰。它被高度糖基化，可能形成同源三聚體，并介導(dǎo)受體結(jié)合和與宿主細(xì)胞膜融合。刺激中和抗體的主要抗原以及細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的重要靶標(biāo)在S蛋白上。
• M蛋白（membrane glycoprotein）具有一個(gè)短的N末端結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域在包膜的外表面上突出并跨過(guò)該包膜3次，在包膜內(nèi)留有一個(gè)長(zhǎng)的C末端。M蛋白在病毒裝配中起重要作用。
• 核衣殼蛋白N（nucleocapsid phosphoprotein）與RNA基因組結(jié)合形成核衣殼。它可能參與病毒RNA合成的調(diào)控，并可能在病毒出芽過(guò)程中與M蛋白相互作用。
• HCoV-OC43中發(fā)現(xiàn)血凝素酯酶糖蛋白（HE）。血凝素部分與宿主細(xì)胞表面的神經(jīng)氨酸結(jié)合，可能使病毒初吸附到膜上。酯酶從神經(jīng)氨酸裂解乙?；?。冠狀病毒的HE基因與C型流感HE糖蛋白具有序列同源性，可能反映了這兩種病毒之間的早期重組。
• 小包膜E（envelope protein）蛋白將其C末端留在包膜內(nèi)，然后跨越該包膜或彎曲并在內(nèi)部投射其N(xiāo)末端。

根據(jù)CDC和WHO的介紹，針對(duì)HCoV-OC43的核酸診斷一般是針對(duì)RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene E， Gene S更多用于對(duì)應(yīng)藥物和疫苗的開(kāi)發(fā)。

以往針對(duì)試劑盒檢測(cè)限的性能評(píng)價(jià)，一般是選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽(yáng)性病毒來(lái)作為標(biāo)準(zhǔn)品，用于性能評(píng)價(jià)。但是兩者都具有很明顯的確定，首先體外轉(zhuǎn)錄的RNA，一般是很純，單一，不涉及提取，不符合臨床病毒的微環(huán)境，因此必然造成檢測(cè)靈敏度被高估，這也是存在高概率假陰性的主要原因；再次臨床陽(yáng)性病毒，即使是滅活的病毒，也是存在很大的生物安全隱患，因此要求實(shí)驗(yàn)室級(jí)別為P3-P4，大部分開(kāi)發(fā)診斷試劑盒單位都不滿(mǎn)足改要求，另外臨床陽(yáng)性病毒也是來(lái)源很有限，不能被穩(wěn)定供應(yīng)，反復(fù)用于試劑盒的性能評(píng)價(jià)。

因此，有病毒的完整包膜結(jié)構(gòu)，有HCoV-OC43對(duì)應(yīng)的核酸序列，但是生物安全風(fēng)險(xiǎn)較低的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，完美的克服了如上的缺點(diǎn)，非常適合用于核酸診斷性能評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品。

科佰生物開(kāi)發(fā)了基于NCBI公布序列的假病毒產(chǎn)品，用于各診斷試劑盒的性能評(píng)價(jià)，其對(duì)應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)如下：

1. hCov-OC43-N 假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，區(qū)別于以往體外合成的RNA、臨床陽(yáng)性活病毒，完美克服兩者的缺點(diǎn)，真正適合用于試劑盒的性能評(píng)價(jià)，包含檢測(cè)限、特異性，重復(fù)性等；
2. 根據(jù)HCoV-OC43冠狀病毒的特點(diǎn)，選取了RdRp(RNA-dependent RNA polymerase)、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合計(jì)3個(gè)區(qū)段的序列，用于假病毒的包裝，3個(gè)區(qū)段很好的表征了HCoV-OC43的特征序列；
3. 科佰生物設(shè)計(jì)了ddPCR體系的引物、探針序列，可不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提下完成對(duì)假病毒的QC拷貝數(shù)檢測(cè)，非常準(zhǔn)確表征標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù)，而且克服了Q-PCR分析CT值的相對(duì)判斷標(biāo)準(zhǔn)的不準(zhǔn)確性；
4. hCov-OC43-N 假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，無(wú)致病性，可再生，質(zhì)控方法可靠，批次間穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期穩(wěn)定制備和供應(yīng)，而且要求實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別為P2，滿(mǎn)足很多單位的安全需求。